北京中诺泰安科技有限公司

程艳：      :

蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测

酶抑制率法（分光光度法）试剂  使用说明

本试剂为国家标准快速检验方法GB/T5009.199-2003的配套试剂。酶活性和对农药的灵敏度指标均达到或超过了国家标准要求，可以在各种型号的农药残毒检测仪（分光光度法）上使用，具有稳定性好、灵敏度高和使用方便等特点。

一、试剂配制

1. 缓冲液试剂：整包倒入大烧杯中，加1000mL纯净水溶解，酸碱度为pH8.0，常温保存；

2. 乙酰胆碱酯酶：取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存，一周内用完。也可将溶解后的酶液分成几个小瓶，将其冷冻，用时融化，但不能重复多次冷冻、化解。

3. 显色剂：取一支显色剂加入20mL缓冲溶液，避光保存；

4. 底物：取一支底物加20mL缓冲溶液，摇匀后置4℃冰箱中保存；

二、分析步骤

1. 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，（非叶菜类取2g）放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，手摇振荡1～2分钟，或超声波振荡30秒钟，倒出提取液，静置3~5min，待用。

2. 对照溶液测试： 先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL缓冲溶液，摇匀后于37°C放置15min，加入100微升底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录初始吸光度A₁和反应3 min时的吸光度A₂，A₂-A₁=DA₀。

3. 样品溶液测试：先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录初始吸光度A₁和反应3 min时的吸光度A₂，A₂-A₁=DA_t。

三、结果计算

结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。

抑制率（%）=[ （DA₀-DA_t）/ DA₀]×100 

当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。

对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。

四、注意

1. 每批样品的控制时间、温度条件必须与对照溶液的条件**。

2. 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，不要剪的太碎。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也不要剪的太碎。

3. 当温度条件低于37°C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶对照溶液测试得到的吸光度A₂-A₁≥ 0.3以上，即可往下操作。当对照溶液酶液的加入量大一些时，也可使A₂-A₁≥0.3以上。

4. 当吸光度大到无法读取时，说明测定液浑浊有干扰。

五、产品有关技术指标

1. 代表性农药的检出下限见下表

2. 乙酰胆碱酯酶的活性：（室温20°C以上进行实验）DA₀≥0.3。

六、包装及保存条件

每包可做200份样品，0°C以下冰箱冷冻保质期为三年，配成试剂后保存期为一周